Забор крови на ретикулоциты

Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями является на практике наиболее используемым методом подсчета количества ретикулоцитов. Это связано с тем, что метод простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, в связи с чем может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории.

Принцип метода

Выявление зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками с дальнейшим подсчетом их в мазке крови.

Реактивы

Можно использовать один из следующих красителей:

Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать 96% этанол в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски.
Раствор азура I: азур I – 1 г, аммония оксалат – 0,4 г, натрия хлорид – 0,8 г, этиловый спирт 96% — 10 мл, дистиллированная вода – 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2 – 3 дня в термостат при 37° C и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать.
Раствор азура II: азур II – 1 г, натрия цитрат – 5 г, натрия хлорид – 0,4 г, дистиллированная вода – 45 мл. Раствор оставляют в термостат при 37° C на 2 суток, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15 – 20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Хранят в посуде из темного стекла.

Специальное оборудование

Микроскоп.

Ход определения

Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке.

Окраска ретикулоцитов на стекле

При окраске ретикулоцитов на стекле хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из перечисленных выше красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Стеклографом маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски. В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте. Перед проведением анализа готовят влажную камеру. Обычно для этого пользуются чашкой Петри с уложенными по краям валиками смоченной ваты или фильтровальной бумаги. Наносят каплю крови на мазок краски, готовят из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влажную камеру на 3 – 10 мин. Затем высушивают мазки на воздухе.

Окраска ретикулоцитов в пробирке

Окраска ретикулоцитов в пробирке отличается при использовании разных красителей.

Метод 1 – окраска ретикулоцитов в пробирке бриллиантовым крезиловым синим.

Перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1% раствора оксалата калия 4 капли раствора краски бриллиантового крезилового синего. В краску добавляют 0,04 мл крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 минут. Затем снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 2 — окраска ретикулоцитов в пробирке азуром II.

В пробирку помещают 0,05 мл раствора краски азур II и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20 – 30 минут. Снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 3 — окраска ретикулоцитов в пробирке азуром I.

В пробирку помещают 0,3 – 0,5 мл раствора краски азур I и 5 – 6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку закрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 1 – 1,5 часа (ретикулоциты окрашиваются лучше при экспозиции 1,5 – 3 часа). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

В настоящее время в продаже имеются готовые красители для ретикулоцитов заводского изготовления. Окраска ретикулоцитов с их помощью производится согласно прилагаемой инструкции.

Подсчет ретикулоцитов.

Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом. В мазке ретикулоциты и эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в ретикулоцитах – в синий (при окраске азуром II и бриллиантовым крезиловым синим) или синевато-фиолетовый цвет (при окраске азуром I).

Фотографии ретикулоцитов:

Находят поля зрения, где эритроциты располагаются раздельно. В этих полях зрения необходимо подсчитать не менее 1000 эритроцитов и отметить среди них количество эритроцитов, содержащих зернисто-нитчатую субстанцию. Большая точность получается при подсчете на 2000 – 3000 эритроцитов.

В связи с тем, что в поле зрения располагается большое количество эритроцитов, что затрудняет подсчет, необходимо ограничить (уменьшить) поле зрения. Для этого можно воспользоваться либо специальным окуляром, в котором можно уменьшить поле зрения до требуемых размеров, либо воспользоваться специальным «окошком» (из бумаги вырезают круг диаметром несколько меньше окуляра, в центре круга вырезают небольшой ромбик и вставляют полученное окошко в окуляр).

Количество подсчитанных ретикулоцитов выражают на 100 (в процентах) или на 1000 (в промилле) эритроцитов.

Пример: При подсчете в мазке 1000 эритроцитов выявлено, что 15 эритроцитов из 1000 имеют зернисто-сетчатую субстанцию той или иной степени, то есть являются ретикулоцитами. Следовательно, количество ретикулоцитов в данном случае составляет 1,5% или 15‰.

Клиническое значение определения количества ретикулоцитов.

Ретикулоциты — юные формы эритроцитов, которые содержат зернисто-нитчатую субстанцию, выявляемую при помощи специальной окраски. Число ретикулоцитов в крови отражает регенеративные свойства костного мозга.

Количество ретикулоцитов отражает скорость продукции эритроцитов в костном мозге. Их подсчет имеет значение для оценки степени активности эритропоэза. Целесообразно для оценки тяжести анемии использовать «ретикулоцитарный индекс» РИ.

Подсчет ретикулоцитов целесообразно проводить в комплексе с общим анализом крови.

Показания:

диагностика эффективности гемопоэза;
оценка реакции на терапию препаратами железа, фолиевой кислоты, витамина В₁₂, эритропоэтина;
мониторинг эффекта трансплантации костного мозга;
дифференциальная диагностика анемий, особенно В₁₂— или фолиеводефицитной.

Подготовка Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.

кровопотеря или разрушение эритроцитов;
гемолитическая анемия;
лечение В₁₂-дефицитной анемии;
эффективная терапия железодефицитных анемий препаратами железа;
талассемия;
малярия;
гематологические заболевания: полицитемия, метастазы рака в костный мозг;
острое кислородное голодание.
апластическая анемия;
гипопластическая анемия;
нелеченная В₁₂-дефицитная анемия;
аутоиммунные заболевания системы кроветворения;
алкоголизм;
метастазы рака в кости;
микседема;
заболевания почек.

Основные понятия

Характерная особенность молодых форм эритроцитов – в цитоплазме присутствует зернисто-нитчатая субстанция, представляющая собой агрегированные рибосомы и митохондрии. Выявить данную субстанцию можно, используя особый метод окрашивания мазков крови. Такую окраску ретикулоцитов называют суправитальной, то есть она производится без предварительной фиксации клеток.

Группы ретикулоцитов

Всего специалисты выделяют пять основных групп ретикулоцитов. Отличаются они по ретикулярной сеточке. Густота ее и возраст находятся в обратной пропорциональности: чем гуще сеточка, тем они моложе. Разберемся, что представляет собой самый молодой ретикулоцит.

• Ретикулоцитарный криз, сопровождающий В12-дефицитную анемию.

Читайте также:

Ретикулоциты - что это

• Гемолитическая анемия.

• Эритролейкоз.

Функции, которые выполняют ретикулоциты

Ретикулоцит — это тоже эритроцит. Для него характерна такая же функция, как и для эритроцитов. То есть клетки также переносят молекулы кислорода к разным тканям и органам, однако эффективность данного процесса значительно ниже, чем при переносе кислорода зрелыми эритроцитами. Ретикулоциты могут адсорбировать молекулы железа, которое содержится в гемоглобине. Это возможно благодаря рецепторам, восприимчивым к трансферрину. Зачем осуществляют подсчет ретикулоцитов? Об этом далее.

Механизм забора крови

Забор образца крови на определение этого показателя производится в составе общего анализа. Если существует необходимость определения уровня ретикулоцитов, то врач, который назначил анализ, указывает в направлении необходимость дополнительного подсчета.

Данный анализ не нуждается в особой подготовке, однако традиционно его сдают натощак утром. В то же время, если существует необходимость, то его можно сдать в любое время суток. Кровь для анализа следует брать из пальца, ее исследование проводится в лаборатории, в гематологическом отделе.

Подсчёт количества ретикулоцитов осуществляется в суправитально окрашенном мазке. Используется микроскопический метод, то есть их количество просто подсчитывают, поместив образец крови под микроскоп. На сегодняшний день существует аппаратный метод подсчета. Используют его современные лаборатории.

Обозначение ретикулоцитов в анализе крови — RET.

Проведение анализа

Существует несколько методов проведения подобного исследования:

Стеклышко моют, сушат и нагревают при помощи специальной горелки. Далее на него наносят один из трех красителей, затем добавляют каплю крови, после чего делают тонкий мазок. Помещают стеклышко в чашку Петри или другую камеру на определенное время, затем осуществляют его просушивание на свежем воздухе.
Если пользуются пробиркой, то в ней размещают окрашивающее вещество, туда же добавляют каплю крови. Смесь необходимо перемешать. Выжидают время — от 20 минут до 3 часов, это зависит от того, какой реагент применяют. Затем снова перемешивают жидкость, которая находится в пробирке, из нее берут мазки.

Какой метод определяет более точные результаты, трудно сказать. Они оба хороши по-своему, но врач может посчитать нужным проведение анализа определенным способом, тогда он должен указать это в направлении.

Читайте также:

Высокий уровень креатинина в крови

Показатели

При подсчете уровня ретикулоцитов половые расхождения нормы имеют значение лишь после 12 лет. До этого возраста норма у детей обоих полов одинакова. В возрасте примерно 11-12 лет у девочек начинается менструация, которая носят регулярный характер. В результате ежемесячной потери крови расширяется диапазон колебаний эритроидных клеток.

Итак, норма ретикулоцитов в крови:

1. У новорожденных норма находится в диапазоне от 0,15 до 1,5 %.

2. У детей в возрасте двух недель – от 0,45 до 2,0 %.

3. У детей в возрасте одного-двух месяцев – от 0,25 до 0,95 %.

4. У детей в возрасте полугода – от 0,2 до 1,0 %.

5. У детей в возрасте двух-шести лет – от 0,25 до 0,75 %.

6. У детей в возрасте шести-двенадцати лет – от 0,25 до 1,3 %.

7. У мужчин старше двенадцати лет – от 0,25 до 1,7 %.

Читайте также:

Переливание крови из вены в ягодицу

8. У женщин старше двенадцати лет – от 0,12 до 2,1 %.

Что означает ситуация, когда ретикулоциты повышены?

Увеличение количества ретикулоцитов в крови

При анемиях различной этимологии определение числа ретикулоцитов играет особую роль. Если в крови повышено их содержание, то такая патология называется ретикулоцитозом. Если увеличение сопровождается повышением уровня гемоглобина, то это говорит о том, что костный мозг обладает хорошей регенераторной способностью. Это может происходить, если присутствуют следующие факторы:

• Гемолитическая анемия разной этимологии. Представляет собой ряд заболеваний, которые характеризуются разрушением эритроцитов. Подобное явление называется гемолизом. В этом случае содержание в крови ретикулоцитов может достигать 60 %. Если возникает гемолитический криз, данная цифра может усугубиться.

• Отравление гемотоксинами, вызывающими гемолиз. К гемотоксинам можно отнести яд гадюки и некоторые лекарственные препараты, которые используются для терапии эритремии. Малярийные токсины также способны вызывать гемолиз.

• Курение.

• Терапия «Леводопой» при болезни Паркинсона.

• Длительный прием некоторых противовоспалительных и жаропонижающих средств.

• Терапия лекарственным препаратом «Эритропоэтин» анемических заболеваний.

Читайте также:

PDW анализ крови

• Метастазы костного мозга.

• Период восстановления после лучевой или химической терапии.

• Малярия.

• Полицитемия.

• Постгеморрагические анемии.

Ретикулоцитоз может быть ложным и истинным.

Для чего сдавать анализ на ретикулоциты? Этот вопрос часто задают.

Ложный и истинный ретикулоцитоз

Истинный ретикулоцитоз характеризуется повышением в крови числа молодых ретикулоцитов, которое сопровождается увеличением их количества в костном мозге.

Для ложного ретикулоцитоза характерно повышение числа ретикулоцитов исключительно в периферической крови, при этом в костном мозге их уровень остается в норме либо слегка понижен.